琼脂糖凝胶电泳实验过程
一、操作步骤：
1、电泳方法
一般的核酸检测只需要琼脂糖凝胶电泳就可以；如果需要分辨率高的电泳，特别是只有几个bp的差别应该选择聚丙烯酰胺凝胶电泳；用普通电泳不合适的巨大DNA链应该使用脉冲凝胶电泳。
2、凝胶浓度
对于琼脂糖凝胶电泳，浓度通常在0.5～2%之间，低浓度的用来进行大片段核酸的电泳，高浓度的用来进行小片段分析。低浓度胶易碎，小心操作和使用质量好的琼脂糖是解决办法。
3、缓冲液
常用的缓冲液有TAE和TBE，而TBE比TAE有着更好的缓冲能力。电泳时使用新制的缓冲液可以明显提高电泳效果。
4、电压和温度
电泳时电场强度不应该超过20V/cm，电泳温度应该低于30℃，对于巨大的DNA电泳，温度应该低于15℃。
5、DNA样品的纯度和状态
注意样品中含盐量太高和含杂质蛋白均可以产生条带模糊和条带缺失的现象。乙醇沉淀可以去除多余的盐，用酚可以去除蛋白。
6、DNA的上样
正确的DNA上样量是条带清晰的保证。注意太多的DNA上样量可能导致DNA带型模糊，而太小的DNA上样量则导致带信号弱甚至缺失。
7、Marker的选择
DNA电泳一定要使用DNA Marker或已知大小的正对照DNA来估计DNA片段大小。Marker应该选择在目标片段大小附近ladder较密的，这样对目标片段大小的估计才比较准确。
8、凝胶的染色和观察
实验室常用的核酸染色剂是溴化乙锭（EB），染色效果好，操作方便，但是稳定性差，具有毒性。注意观察凝胶时应根据染料不同使用合适的光源和激发波长，如果激发波长不对，条带则不易观察，出现条带模糊的现象。
二、注意事项：
1、巨大的DNA链用普通电泳可能跑不出胶孔导致缺带。
2、高浓度的胶可能使分子大小相近的DNA带不易分辨，造成条带缺失现象。
3、电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，pH值上升，缓冲性能下降，可能使DNA电泳产生条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。
4、如果电泳时电压和温度过高，可能导致出现条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。特别是电压太大可能导致小片段跑出胶而出现缺带现象。
5、变性的DNA样品可能导致条带模糊和缺失，也可能出现不规则的DNA条带迁移。在上样前不要对DNA样品加热，用20mM NaCl缓冲液稀释可以防止DNA变性。
6、太多的DNA上样量可能导致DNA带型模糊，而太小的DNA上样量则导致带信号弱甚至缺失。
为什么电泳使用琼脂糖而不用琼脂
琼脂糖凝胶电泳其分析原理与其它支持物电泳的最主要区别是：它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。琼脂糖凝胶具有网络结构，直接参与带电颗粒的分离过程，在电泳中，物质分子通过空隙时会受到阻力，大分子物质在泳动时受到的阻力比小分子大，因此在凝胶电泳中，带电颗粒的分离不仅依赖于净电荷的性质和数量，而且还取决于分子大小，这就大大地提高了分辨能力。
琼脂糖系天然的琼脂加工制得，天然琼脂是一种多聚糖，主要由琼脂糖（约占80%）及琼脂胶组成。琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质，不带电荷。而琼脂胶是一种含硫酸根和羧基的强酸性多糖，由于这些基团带有电荷，在电场作用下能产生较强的电渗现象。所以常用于血清蛋白、血红蛋白、脂蛋白、糖蛋白、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶等同工酶的分离和鉴定，为临床某些疾病的鉴别诊断提供了可靠的依据。与免疫化学反应相结合发展成为免疫电泳技术，用于分离和检测抗原。可对目前常用的琼脂糖进行某些修饰，如引入化学基团羟乙基，则可使琼脂糖在65℃左右便能熔化，被称为低熔点琼脂糖。该温度低于DNA的熔点，而且凝胶强度又无明显改变。以此为支持物进行电泳，称为低熔点琼脂糖凝胶电泳，主要应用于DNA研究。如DNA鉴定，DNA限制性内切酶图谱制作等，为DNA分子及其片段分子量测定和DNA分子构象的分析提供了重要手段。
总结琼脂糖凝胶电泳的优点如下：
1. 琼脂糖凝胶电泳操作简单，电泳速度快，样品不需事先处理就可以进行电泳。
2. 琼脂糖凝胶结构均匀，含水量大(约占98%~99%)，近似自由电泳，样品扩散较自由电流，对样品吸附极微，因此电泳图谱清晰，分辨率高，重复性好。
3. 琼脂糖透明无紫外吸收，电泳过程和结果可直接用紫外光灯检测及定量测定。
4. 电泳后区带易染色，样品极易洗脱，便于定量测定。制成干膜可长期保存。
琼脂糖凝胶电泳操作应注意哪些环节
答：1. 根据片段大小配制不同浓度的胶（改变分辨率），片段越小，需要胶浓度越大。
2. 胶要现制先用。
3. 选择合适的Marker。
4. 配胶的缓冲液与电泳缓冲液要是同一种，且浓度一致（1倍）。
5. 点样时要加入loading buffer，并注意，不要将样点到点样孔之外（飘样），也不要将胶戳漏（漏样）。
6. 根据片段大小，及电泳检测目的，选择合适的电压及电泳时间。
7. EB染色。可选择制胶时加入EB（要在溶玩胶后，且温度至室温时（用手握住制胶容器，不烫手即可））；或电泳结束后，将胶放入EB溶液中染色。
琼脂糖凝胶电泳跑成这样是怎么回事
琼脂糖凝胶具有网状结构，网状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。核酸分子在琼脂糖凝胶中电泳时，具有电荷效应和分子筛效应，泳动时受到阻力。
琼脂糖凝胶的浓度需要根据你的目的条带长度来调整，通常在浓度0.5~2%之间。低浓度胶用来进行大片段核酸电泳，高浓度胶用来进行小片段核酸分析。所以琼脂糖浓度影响核酸分子“跑”的速度。
在我们实验室，目的条带一般不超过1kb，我们用的是1%的胶。至于条带模糊不清，弥散，可能是以下原因1）电泳缓冲液多次使用后，离子浓度较低，pH值上升，缓冲性能下降，可能出现条带模糊和不规则迁移的现象。
2）加样量太多可能导致条带模糊，加样量太少则可能条带弱甚至缺失。
3）电压和温度过高，可能导致条带模糊或迁移。
4）样品中含盐太高和含杂志蛋白均可以产生条带模糊和条带缺失的现象。
5）核酸染色剂的稳定性及用量问题。实验室常用的核酸染色剂是溴化乙锭（EB），染色效果好，稳定性差，有毒。在凝胶温度50~60℃时加EB。附之前实验的图，Marker特别淡是因为Marker时间太久了，条带有点模糊，后来换了新的缓冲液就好了很多。就酱，分子生物学研究狗一枚，欢迎探讨指正~
琼脂糖凝胶电泳的原理什么
我认为琼脂糖凝胶电泳的原理是：利用电场的力将小分子物质在琼脂糖凝胶中移动,并停留在特定位置,从而在凝胶中分离。
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